Alphabio® Cellsurvival无血清冻存液

一、产品简介：

在细胞体外培养过程中，为实现细胞长期保存并保持其生物活性，通常需要将细胞进行冷冻保存，待实验需要时再复苏培养。目前，最常用的细胞冻存方法是液氮冷冻保存，配合适量保护剂使细胞缓慢降温至目标温度，从而达到保护细胞的目的。

Alphabio® Cellsurvival无血清冻存液是在长期细胞研究基础上，针对细胞冻存和复苏条件不断优化后开发的专用冻存产品，适用于数百种细胞类型。该产品添加了细胞沉降稳定剂，可有效延缓细胞在冻存过程中的沉降速率，避免细胞间挤压，提高冻存效果。同时，配方中包含细胞膜保护剂、渗透性和非渗透性细胞保护剂，这些成分可与水分子结合，通过水合作用弱化水的结晶过程，增加溶液黏性，从而减少冰晶生成，显著降低细胞冻存过程中冰晶对细胞的损伤，有效提升细胞复苏存活率。

本产品成分明确，不含血清和动物源性蛋白，可最大限度减少细菌、病毒及支原体等污染风险，保障细胞冻存安全。适用于常规细胞系、原代细胞、无血清培养细胞及蛋白表达细胞。相比传统冻存液，使用本产品无需复杂的程序降温或昂贵的降温仪器。细胞经重悬后可直接置于-80℃超低温冰箱长期保存。如需液氮保存，需先在-80℃冰箱中冻存至少24-48小时后，再转移至液氮罐中保存。

二、保存条件：

4°C保存，有效期一年。

请勿冷冻保存本产品。。

三、使用说明：

1）细胞冻存：

a. 贴壁细胞处理：

去除培养液，用无菌PBS轻轻洗涤细胞一次，去除残留血清。加入适量细胞消化液消化细胞。用移液器轻轻吹打细胞，当显微镜下观察细胞变圆或肉眼观察到细胞间出现缝隙时，即可吹打并迅速吸除胰酶。立即加入含血清的完全培养基终止消化，轻柔吹打使细胞充分重悬。注意避免过度消化，以免影响细胞后续生长和冻存效果。

b. 悬浮细胞处理：

从步骤c开始操作。

c. 离心和重悬：

将细胞悬液转移至15 ml无菌离心管中。进行细胞计数，计算细胞总数及所需冻存液量（冻存密度一般为1×10⁶～1×10⁷ cells/ml）。以100-200×g离心5-10分钟（根据细胞类型调整），弃上清。

e. 重悬及冻存：

加入适量无血清冻存液，轻柔吹打使细胞充分重悬。根据需要调整细胞密度（通常为1×10⁶ cells/ml或更高）。分装至1.5 ml或2 ml冻存管中，做好标识。注意：拟置于液氮保存的细胞，必须使用专用液氮冻存管，避免普通离心管因低温爆裂导致危险。将冻存管直接放置于-80℃冰箱保存。若后续需转液氮长期保存，需在-80℃冰箱保存24小时后转移。

2）细胞复苏：

a. 解冻：

从-80℃冰箱或液氮罐中取出冻存管，迅速置于37℃水浴中，轻轻晃动，约1分钟内解冻至仅有少量冰块残留。

b. 预处理：

将细胞悬液转移至15 ml无菌离心管，加入5-10 ml预热的完全培养基，轻轻混匀。

c. 离心及重悬：

以200-300×g离心5-10分钟（视细胞类型调整），确保细胞沉淀后小心弃去上清。加入适量预热完全培养基，轻柔吹匀后接种至培养器皿中，置于细胞培养箱培养。