产品简介：

BCA蛋白定量法是实验室目前广泛使用的蛋白定量方法之一，实现了对蛋白质的高灵敏度、高稳定性、高兼容性的快速浓度测定。其作用原理是蛋白质分子中肽链结构在碱性环境下能与Cu2+生产络合物，同时将Cu2+还原成Cu+，而 BCA 试剂可以特异性地与Cu+结合，形成稳定的有颜色的反应复合物，并在562nm处有最高的光吸收值，该复合物颜色的深浅与蛋白浓度成正比，可以根据吸收值的大小来测定蛋白含量。本试剂盒含有牛血清白蛋白（BSA）溶液作为蛋白标准品溶液，测定范围为20-2000 μg/mL，最小检测蛋白量达到0.5 μg，待测样本体积为1-20 μL。

包装清单：

保存条件：

室温保存。蛋白标准稀释后-20℃保存。保质期12个月。 

使用说明：

1. 配置蛋白标准品

a. 取0.8 mL的蛋白标准稀释液溶解蛋白标准品（BSA），充分溶解后配制成25mg/ml的蛋白标准溶液。配制后可立即使用，也可以-20ºC长期保存。

b. 取适量25 mg/mL蛋白标准，稀释至终浓度为0.5 mg/mL，稀释后的0.5 mg/mL蛋白标准可以-20ºC长期保存。

2. BCA工作液配制

根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液，充分混匀。BCA工作液室温24小时内稳定，现用现配最佳。

3. 蛋白浓度测定

a. 将0.5 mg/mL标准品按0、1、2、4、8、12、16、20 µL分别加到96孔板中，加PBS补足到20 µL，相当于标准品浓度分别为0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mg/mL。

b. 将样品适当稀释后，取20 µL到96孔板中；

c. 各孔加入200µL BCA工作液，37ºC放置30分钟，BCA法测定蛋白浓度时，颜色会随着时间的延长而不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或适当延长孵育时间，达到最佳检测效果。

d. 用酶标仪测定每个样品及BSA标准品的A562，或540~595 nm之间的其它波长的吸光度，注意要减去空白对照（0 mg/mL标准品）的吸光度。

e. 绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。

注意事项：

1. 实验需要酶标仪一台，测定波长为540-595 nm之间，562 nm最佳。需96孔板。如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定；

3. 试剂在低温条件或长期保存出现沉淀时，可搅拌或 37℃温育使其溶解；

4. 建议每次测定蛋白样品时，都须绘制标准曲线，以获得准确数据；

5. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内；

6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。