检测原理：

Cell Counting Kit-8（简称CCK-8）试剂盒是一种基于WST-8化合物的高灵敏度细胞增殖与细胞毒性检测试剂盒。WST-8是MTT法的升级版，其工作原理是：在电子耦合试剂的作用下，WST-8能够被细胞内的线粒体脱氢酶还原，生成一种水溶性强、呈橙黄色的甲臜（Formazan）产物。甲臜的颜色深浅与细胞增殖呈正相关，而与细胞毒性则呈负相关。通过在450nm波长处使用酶标仪测定光密度（OD）值，可以间接反映活细胞的数量。

使用方法：

1）细胞接种与药物处理：在细胞增殖实验中，每孔加入100 µL 2000个细胞；在细胞毒性实验中，每孔加入100 µL 5000个细胞（具体细胞数需根据细胞大小、增殖速度等因素进行优化）。根据实验需求，在培养过程中对细胞给予0-10 µL的特定药物刺激。

2）添加CCK-8溶液：每孔加入10 µL CCK-8溶液。若起始培养体积为200 µL，则每孔需加入20 µL CCK-8溶液，其他情况按比例调整。可以设置空白对照孔，加入相同量的细胞培养液和CCK-8溶液，但不加入细胞。如果担心药物可能干扰检测，可设置额外的空白对照孔，加入相应的细胞培养液、药物和CCK-8溶液，但不加入细胞。

3）孵育时间：继续在细胞培养箱内孵育0.5-4小时。一般情况下，1小时的孵育时间即可，具体时间可根据细胞类型和密度等实验条件调整。初次实验时，可以分别在0.5、1、2、4小时后测定吸光度（OD450），选取最适合的时间点用于后续实验。

4）吸光度测定：使用450 nm波长测定吸光度。如果仪器不支持450 nm滤光片，可以选择420-480 nm的滤光片，或使用650 nm等大于600 nm的波长作为参考波长进行双波长测定。

5）HeLa细胞检测：将不同数量的HeLa细胞（每孔100 µL培养液）接种到96孔板中，培养至细胞贴壁充分后，每孔加入10 µL CCK-8溶液，孵育2小时后使用酶标仪测定A450吸光度。检测效果图仅供参考，实际数据可能因检测仪器等因素有所不同。

有效期：2年。

保存方法：冰袋运输，-25~-15℃避光干燥保存。

注意事项：

1）蒸发问题：在使用96孔板进行检测时，长时间培养可能会导致蒸发。为避免此问题，建议：不使用96孔板周围一圈孔位，可向其添加相同量的PBS、水或培养液；将96孔板置于靠近培养箱水源的位置，以减缓蒸发速率。

2）还原剂干扰：本试剂盒依赖脱氢酶催化反应进行检测，因此，体系中存在还原剂（如抗氧化剂）可能会干扰结果。若待测体系中含有较多还原剂，请尽量去除或采取相应措施。